2, Taq Platinum PCR Mix
Itumọ Akitiyan
Ẹyọ 1 (U) Taq Platinum DNA Polymerase aṣayan iṣẹ-ṣiṣe jẹ asọye bi iye ensaemusi ti a nilo lati ṣafikun 10 nmol deoxynucleotides sinu awọn nkan ti ko ni itutu acid ni 74 ° C laarin iṣẹju 30 nipa lilo DNA sperm salmon ṣiṣẹ bi awoṣe/alakoko.
Iṣakoso Didara
Mimọ nipasẹ iṣawari SDS-PAGE jẹ diẹ sii ju 99%; Ko si iṣẹ ṣiṣe ti nuclease exogenous ti a rii; Jiini ẹda ẹda kanṣoṣo ninu jiini eniyan le pọ si daradara; Ko si iyipada iṣẹ ṣiṣe pataki nigbati o fipamọ ni iwọn otutu yara fun ọsẹ kan.
Awọn Imọ -ẹrọ Imọ -ẹrọ akọkọ
O ni 5′-3 activity exonuclease aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ati 3′-5 ′ exonuclease aṣayan iṣẹ-ṣiṣe, ati iṣootọ rẹ wa lẹgbẹẹ Pfu polymerase. Iyara itẹsiwaju ti Taq Platinum Polymerase yiyara ju Pfu polymerase ati ṣiṣe titobi pọ si. Awọn ọja PCR le ni asopọ taara si ipari airotẹlẹ tabi ti ẹda pẹlu vector TA. Ti ṣiṣe iṣapẹẹrẹ nilo lati ni ilọsiwaju, o ni iṣeduro lati sọ di mimọ ni akọkọ ki o ṣafikun awọn iṣagbega 3'-DA ṣaaju iṣiṣẹ sinu vector TA.
Ọkan-tube Taq Platinum MasterMix (Iwe-ẹri Ọja ti Imọ-giga ti Orilẹ-ede)
Ta Taq Platinum MasterMix ti ni ilọsiwaju pataki ati ifamọra ti ifesi PCR ati pe o le pọ si awọn awoṣe eka pẹlu akoonu GC giga, eto ile -iwe ati iru bẹẹ. Bi awọn idaako 2 ti awoṣe ibi -afẹde le pọ si, ni idaniloju awọn abajade esiperimenta deede diẹ sii.
Formula Alailẹgbẹ Taq Platinum MasterMix agbekalẹ jẹ ki gbogbo eto ifura jẹ iduroṣinṣin pupọ, ati pe iṣẹ-ṣiṣe kii yoo kan nipasẹ didi-tun-tunṣe tabi ibi ipamọ igba pipẹ ni 4 ° C.
Stable Iduroṣinṣin ati lilo daradara idapọmọra idapọmọra idapọmọra PCR le ṣe iṣẹ ṣiṣe ni iyara ati irọrun, dinku idinku iṣẹ pupọ ati aṣiṣe iṣapẹẹrẹ. Imudara PCR ti o ni agbara giga ati iṣapeye tun wa ninu apopọ, eyiti o dinku awọn ibeere lori awọn ipo PCR.
Product Ọja yii ni awọn eto ti o ni awọ ati ti ko ni awọ. Awọn ọja MasterMix ti o ni awọ-awọ le jẹ itanna taara lẹhin PCR, laisi ṣafikun ifipamọ ikojọpọ.
Awọn ohun elo
O le rọpo Pfu polymerase lati ṣe alekun awọn ọja iṣootọ giga lati awọn awoṣe idiju bii awọn jiini, ati pe o dara fun awọn ohun elo bii oniye ti awọn jiini ikosile, awọn iyipada aaye kan pato ati itupalẹ ti polymorphism nucleotide nikan (SNP), abbl.
Awọn iṣọra ni Ṣiṣeto Awọn alakoko PCR:
Ipilẹ alakoko jẹ igbagbogbo 20-25 mer. Bibẹẹkọ, nigbati o ba n ṣe PCR ida kukuru, ipari alakoko yẹ ki o pọ si 30-35 mer.
■ Ko si ibaramu ibaramu laarin awọn alakoko meji, ni pataki fun awọn ipilẹ 3 ti o kẹhin ni opin 3..
Content Akoonu GC yẹ ki o jẹ 50-60%, ki o yago fun ọlọrọ agbegbe GC tabi AT. Lati le ṣe alakoko ati awoṣe di iduroṣinṣin, yago fun eto ọlọrọ AT ni ipari 3..
Yago fun alakoko lati ṣe agbekalẹ eto -ẹkọ keji.
■ Yan awọn alakoko meji pẹlu iwọn otutu Tm sunmo ara wọn.
Iṣiro ti Iye Tm ti Awọn alakoko fun PCR:
■ Nigbati alakoko ba kere ju 20 mer: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ Nigbati alakoko jẹ diẹ sii ju 20 mer: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, nibiti L jẹ ipari ti alakoko.
■ Ṣeto iwọn otutu otutu ni (Tm-5) ° C.
PCR alakoko Input
Ifojusi ikẹhin ti o yẹ ti awọn alakoko le ṣee yan laarin 0.1 μM ati 1.0 μM. Idojukọ alakoko ti o kere pupọ yori si ikore kekere ti awọn ọja titobi, lakoko ti o ga pupọ ifọkansi alakoko kan jẹ itara si titobi ti kii ṣe pato. Nigbagbogbo, nigbati iye awoṣe DNA ba tobi tabi DNA awoṣe ti o nipọn (bii DNA jiini eniyan) ti a lo bi awoṣe, ifọkansi alakoko yẹ ki o dinku. Nigbati iye DNA awoṣe jẹ kekere tabi rọrun awoṣe DNA (fun apẹẹrẹ, DNA plasmid, abbl) ti a lo bi awoṣe, ifọkansi alakoko yẹ ki o ga julọ.
Gbogbo awọn ọja le ṣe adani fun ODM/OEM. Fun awọn alaye,jọwọ tẹ Iṣẹ adani (ODM/OEM)
  |
Lo DNA jiini bi awoṣe lati ṣe alekun ida 1. kb.Lẹhin ifesi PCR, mu 5 μl fun wiwa electrophoresis. |
A-1 Àdàkọ
Template Awoṣe naa ni awọn idoti amuaradagba tabi awọn alatako Taq, ati bẹbẹ lọ——— Ṣe awoṣe DNA di mimọ, yọ awọn idoti amuaradagba kuro tabi yọ DNA awoṣe kuro pẹlu awọn ohun elo iwẹnumọ.
Kikopa ti awoṣe ko pari ——Bi o ṣe yẹ ki o mu iwọn otutu denaturation pọ si ati mu akoko denaturation gun.
Deg Irẹwẹsi awoṣe --— Tun-mura awoṣe naa.
A-2 alakoko
Quality Didara to dara ti awọn alakoko ——Re-synthesize primer.
Deg Irẹjẹ alakọbẹrẹ ——Aliquot awọn alakoko ifọkansi giga sinu iwọn kekere fun titọju. Yago fun didi pupọ ati thawing tabi igba pipẹ 4 ° C cryopreserved.
Design Apẹrẹ aipe ti awọn alakoko (fun apẹẹrẹ ipari alakoko ko to, dimer ti a ṣe laarin awọn alakoko, ati bẹbẹ lọ) -Resesign primers (yago fun dida ti alakoko alakoko ati eto ile -iwe keji)
A-3 Mg2+fojusi
G Mg2+ ifọkansi ti lọ silẹ pupọ ——Pi alekun Mg daradara2+ fojusi: Mu Mg naa dara si2+ ifọkansi nipasẹ lẹsẹsẹ awọn aati lati 1 mM si 3 mM pẹlu aarin 0.5 mM lati pinnu Mg ti o dara julọ2+ ifọkansi fun awoṣe kọọkan ati alakoko.
A-4 Afikun iwọn otutu
Temperature Iwọn otutu otutu ti o ga yoo ni ipa lori isopọ ti alakoko ati awoṣe. —— Din iwọn otutu fifẹ silẹ ki o mu ipo naa dara pẹlu gradient ti 2 ° C.
A-5 Ifaagun akoko
Time Akoko itẹsiwaju kukuru —— Mu akoko itẹsiwaju pọ si.
Phenomena: Awọn ayẹwo ti ko dara tun ṣafihan awọn ẹgbẹ ọkọọkan ibi -afẹde.
A-1 Kontaminesonu ti PCR
Koja kontaminesonu ti ọkọọkan ibi -afẹde tabi awọn ọja imudarasi—— Ṣọra ki a ma ṣe fa fifalẹ ayẹwo ti o ni ọkọọkan ibi -afẹde ninu ayẹwo odi tabi da wọn jade kuro ninu tube centrifuge. Awọn reagents tabi ohun elo yẹ ki o jẹ adaṣe lati yọkuro awọn acids nucleic ti o wa, ati pe aye ti kontaminesonu yẹ ki o pinnu nipasẹ awọn adanwo iṣakoso odi.
Contamin Kontaminesonu reagent ——Aliquot awọn reagents ati fipamọ ni iwọn otutu kekere.
A-2 NOMBAr
G Mg2+ ifọkansi ti lọ silẹ pupọ ——Pi alekun Mg daradara2+ fojusi: Mu Mg naa dara si2+ ifọkansi nipasẹ lẹsẹsẹ awọn aati lati 1 mM si 3 mM pẹlu aarin 0.5 mM lati pinnu Mg ti o dara julọ2+ ifọkansi fun awoṣe kọọkan ati alakoko.
Design Apẹrẹ alakọbẹrẹ ti ko pe, ati ọkọọkan ibi-afẹde naa ni isọdọkan pẹlu tito lẹsẹsẹ ti kii ṣe ibi-afẹde. ——Re-design alakoko.
Phenomena: Awọn ẹgbẹ titobi PCR ko ni ibamu pẹlu iwọn ti a nireti, boya nla tabi kekere, tabi nigbakan mejeeji awọn ẹgbẹ iṣapẹẹrẹ kan pato ati awọn ẹgbẹ titobi ti kii ṣe pato waye.
A-1 alakoko
Specific Ipilẹ alakoko ti ko dara
——Re-design alakoko.
Concentration Ifojusi alakoko ti ga ju ——Si alekun iwọn otutu denaturation daradara ati fa akoko denaturation sii.
A-2 Mg2+ fojusi
M Mg2+ ifọkansi ga ju ——Pipe daradara dinku ifọkansi Mg2+: Mu Mg dara si2+ ifọkansi nipasẹ lẹsẹsẹ awọn aati lati 1 mM si 3 mM pẹlu aarin 0.5 mM lati pinnu Mg ti o dara julọ2+ ifọkansi fun awoṣe kọọkan ati alakoko.
A-3 Polymerase Thermostable
Amount Iye ensaemusi ti o pọ ju—— Din iye enzymu ni deede ni awọn aaye arin 0.5 U.
A-4 Afikun iwọn otutu
Temperature Iwọn otutu imukuro ti lọ silẹ pupọ ——Bi iwọntunwọnsi iwọn otutu ti o yẹ sii tabi gba ọna imuduro ipele meji
Awọn iyipo A-5 PCR
Cy Awọn iyipo PCR lọpọlọpọ ju—— Din nọmba awọn iyika PCR din.
A-1 alakoko—— Pataki ti ko dara —— Tun-ṣe apẹrẹ alakoko, yi ipo pada ati gigun ti alakoko lati jẹki pataki rẹ; tabi ṣe PCR iteeye.
A-2 Àdàkọ DNA
——Awọn awoṣe ko jẹ mimọ ——Sọ awoṣe naa tabi yọ DNA jade pẹlu awọn ohun elo iwẹnumọ.
A-3 Mg2+ fojusi
——Mg2+ ifọkansi ga ju ——Rege daradara Mg2+ fojusi: Mu Mg naa dara si2+ ifọkansi nipasẹ lẹsẹsẹ awọn aati lati 1 mM si 3 mM pẹlu aarin 0.5 mM lati pinnu Mg ti o dara julọ2+ ifọkansi fun awoṣe kọọkan ati alakoko.
A-4 dNTP
—— Ifojusi ti awọn dNTP ga pupọ —— Dinku ifọkansi ti dNTP ni deede
A-5 Afikun iwọn otutu
—— Iwọn otutu imunilara kekere —— Ṣe deede mu iwọn otutu imukuro pọ si
Awọn iyipo A-6
——Ti ọpọlọpọ awọn iyipo —— Ṣe alekun nọmba ọmọ naa
Igbesẹ akọkọ ni lati yan polymerase ti o yẹ. Polymerase Taq deede ko le ṣe atunyẹwo nitori aini iṣẹ ṣiṣe exonuclease 3'-5 ', ati aiṣedeede yoo dinku ṣiṣe itẹsiwaju ti awọn ajẹkù. Nitorinaa, polymerase Taq deede ko le ṣe alekun awọn aleebu ti o tobi ju 5 kb lọ. Taq polymerase pẹlu iyipada pataki tabi polymerase iṣootọ giga miiran yẹ ki o yan lati mu ilọsiwaju itẹsiwaju pọ si ati pade awọn iwulo ti titobi ida gigun. Ni afikun, titobi ti awọn ajẹkù gigun tun nilo atunṣe ibamu ti apẹrẹ alakoko, akoko denaturation, akoko itẹsiwaju, pH ifipamọ, ati bẹbẹ lọ Nigbagbogbo, awọn alakoko pẹlu 18-24 bp le ja si ikore ti o dara julọ. Lati le ṣe idiwọ ibajẹ awoṣe, akoko denaturation ni 94 ° C yẹ ki o dinku si iṣẹju -aaya 30 tabi kere si fun iyipo, ati akoko lati dide iwọn otutu si 94 ° C ṣaaju ki titobi yẹ ki o kere si iṣẹju 1. Pẹlupẹlu, ṣiṣeto iwọn otutu itẹsiwaju ni iwọn 68 ° C ati apẹrẹ akoko itẹsiwaju ni ibamu si oṣuwọn ti 1 kb/min le rii daju imudara to munadoko ti awọn ajẹkù gigun.
Iwọn aṣiṣe ti imudara PCR le dinku nipa lilo ọpọlọpọ awọn polymerases DNA pẹlu iṣootọ giga. Laarin gbogbo awọn polymerases Taq DNA ti a rii titi di isisiyi, enzymu Pfu ni oṣuwọn aṣiṣe ti o kere julọ ati iṣootọ giga julọ (wo tabili ti a so mọ). Ni afikun si yiyan enzymu, awọn oniwadi le dinku iwọn iyipada PCR siwaju nipasẹ imudarasi awọn ipo iṣesi, pẹlu iṣapeye idapọmọra ifamọra, ifọkansi ti polymerase thermostable ati iṣapeye nọmba ọmọ PCR.
Awọn isori awọn ọja
IDI YAN WA
Lati idasile rẹ, ile -iṣẹ wa ti n dagbasoke awọn ọja kilasi akọkọ pẹlu titẹle ilana naa
ti didara akọkọ. Awọn ọja wa ti ni orukọ ti o dara julọ ni ile -iṣẹ ati igbẹkẹle ti o niyelori laarin awọn alabara tuntun ati arugbo ..
- Tẹli: +86 010-59822688
- Ilé 5, No. 86, Shuangying West Road, Changping District, Beijing.
- people@tiangen.com
