Kit Kit PCR taara

Imudara iyara ti jiini ibi -afẹde taara lilo ẹjẹ bi awoṣe laisi isediwon.

Ohun elo yii ṣe agbekalẹ alamọdaju alamọdaju alamọ-adaṣe DNA polymerase lati ṣe alekun daradara awọn jiini ẹyọkan ninu jiini eniyan. Eto ifipamọ daradara ti o dara julọ ninu ohun elo yii ṣe iranlọwọ fun polymerase ni ilodi si ni ilodi si idiwọ ti awọn oniduro PCR, nitorinaa le ṣe alekun taara DNA nipa lilo ẹjẹ ati awọn sẹẹli ti aṣa bi awọn awoṣe. Ọja yii rọrun lati ṣiṣẹ ati pe ko nilo awọn igbesẹ idiju bii iwẹnumọ DNA tabi idena ayẹwo.
A pese ohun elo yii bi 2 × MasterMix, ati pe ifesi le ṣee ṣe nipa fifi awoṣe ẹjẹ kun ni afikun ati awọn alakọbẹrẹ wiwa ti o baamu. O le lo lori awọn sẹẹli ti aṣa ti awọn ohun ọmu bii eniyan, eku, elede, ẹran ati awọn ẹya miiran, bakanna bi alabapade tabi 4 ℃ cryopreserved ẹjẹ gbogbo, anticoagulant (EDTA, citrate, heparin), awọn didi ẹjẹ ti o ni omi ati awọn aaye ẹjẹ gbigbẹ ti o fipamọ sori Whatman 903 ati FTA Elute awọn kaadi iṣowo.

Ologbo. Rara	Iṣakojọpọ Iwon
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Fi imeeli ranṣẹ si wa

Apejuwe Ọja

Apeere Idanwo

Awọn ibeere nigbagbogbo

Awọn afi ọja

Awọn ẹya ara ẹrọ

■ Rọrun ati yiyara: Ilọsiwaju PCR le ṣe taara ni lilo ẹjẹ bi awoṣe, laisi iwulo fun awọn igbesẹ tedious ti igbaradi ayẹwo ati isediwon DNA.
Urity Iwa mimọ: Fifẹ iṣapẹẹrẹ iṣaaju ayẹwo ati awọn igbesẹ isediwon DNA le ṣe iranlọwọ lati yago fun kikorò agbelebu ti awọn ayẹwo.
Through Ilọjade giga: Idanimọ PCR fun awọn ayẹwo iwọn-nla ni a le ṣe nipasẹ apapọ ohun elo pẹlu awọn awo PCR 96/384-daradara.
Ality Agbaye ti o lagbara: Ohun elo yii le ṣe alekun daradara awọn ajẹkù GC giga tabi awọn ajẹkù pẹlu eto ile -ẹkọ giga ti eka, ati ipari titobi le to to 5 kb.
Resistance Iduroṣinṣin aapọn ti o lagbara: A le lo ohun elo yii fun ọpọlọpọ awọn eya ati awọn ayẹwo ẹjẹ ti a fipamọ ni awọn ọna oriṣiriṣi.

Awọn ohun elo

Awọn ọja PCR ti ohun elo yii ni “A” ni 3′-opin, eyiti o le lo taara fun ẹda oniye TA. Ohun elo yii le ṣee lo fun titobi ti awọn ajẹsara DNA jiini, itupalẹ jiini ti o ga pupọ ati itupalẹ jiini (bii iṣawari jiini) itupalẹ.

Gbogbo awọn ọja le ṣe adani fun ODM/OEM. Fun awọn alaye,jọwọ tẹ Iṣẹ adani (ODM/OEM)

Ti tẹlẹ: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Itele: Asin Tissue Direct PCR Kit

	Lilo ilokulo EDTA eniyan bi awoṣe, awọn jiini 4 pẹlu awọn akoonu GC ti o yatọ ni a pọ si nipasẹ Apo PCR taara. Eto ifura PCR jẹ 20 μl, ati pe a lo ẹjẹ 1 μl bi awoṣe. M: TIANGEN Alami II; 1: Iwọn ida 1090 bp, akoonu GC 68.1%; 2: Iwọn ida 1915 bp, akoonu GC 70.4%; 3: Iwọn ida 448 bp, akoonu GC 74.8%; 4: Iwọn ida 1527 bp, akoonu GC 61.5%. Awọn abajade esiperimenta: Apo PCR taara yoo ṣe alekun awọn ajẹsara DNA ni imunadoko pẹlu akoonu GC ni sakani 61.5%-74.8%, ni iyanju pe o lagbara lati pọ si awọn ajẹkù GC giga.
	Lilo anticoagulation EDTA eniyan bi awoṣe, awọn jiini 5 pẹlu awọn gigun oriṣiriṣi (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 ati Hn4.0) ni a pọ si nipasẹ Apo PCR taara. Eto ifura PCR jẹ 20 μl, ati pe a lo ẹjẹ 1 μl bi awoṣe. M: TIANGEN Alami II; 1-3: 3 awọn ayẹwo ẹjẹ ti o yatọ; NTC: iṣakoso laisi awọn alakoko. Awọn abajade esiperimenta: Apo PCR taara ẹjẹ le ṣe alekun awọn ajẹkù pẹlu gigun bi gun bi 4 kb, ni iyanju pe o lagbara lati mu awọn ajẹku gigun pọ si.
	Lilo ilokulo EDTA eniyan bi awoṣe, Apo PCR Kit taara ni a lo fun wiwa PCR ti awọn ayẹwo ẹjẹ oriṣiriṣi. Eto ifura PCR jẹ 20 μl, ati pe a lo ẹjẹ 1 μl bi awoṣe. M: TIANGEN Alami II; 1-9: iye ikojọpọ ẹjẹ jẹ 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl ati 5 μl, ni atele; NTC: iṣakoso laisi awoṣe Awọn abajade esiperimenta: Apo PCR taara Tii ni agbara to lagbara si ẹjẹ ati pe o le pọ si awọn ayẹwo ẹjẹ pẹlu iwọn ikojọpọ ti 0.1-5 μl.
	Awọn ayẹwo ẹjẹ lati ọdọ eniyan, eku, adie ati awọn eya miiran pẹlu awọn itọju oriṣiriṣi ni a lo bi awọn awoṣe. A lo Ohun elo PCR taara lati ṣe afikun PRNP (eniyan, 750 bp), Actin (eku, 200 bp), ati β-Actin (Adie, 1.0 kb). Eto ifura PCR jẹ 20 μl, ati pe a lo ẹjẹ 1 μl bi awoṣe. M: TIANGEN Alami II. Awọn abajade idanwo: Apo PCR taara ẹjẹ le ṣee lo lori ọpọlọpọ awọn ayẹwo, ati wiwa PCR taara le ṣee ṣe lori awọn ayẹwo ẹjẹ lati oriṣi awọn oriṣi pẹlu awọn itọju oriṣiriṣi.

Q: Ko si awọn ẹgbẹ titobi

A-1 Àdàkọ

Template Awoṣe naa ni awọn idoti amuaradagba tabi awọn alatako Taq, ati bẹbẹ lọ——— Ṣe awoṣe DNA di mimọ, yọ awọn idoti amuaradagba kuro tabi yọ DNA awoṣe kuro pẹlu awọn ohun elo iwẹnumọ.

Kikopa ti awoṣe ko pari ——Bi o ṣe yẹ ki o mu iwọn otutu denaturation pọ si ati mu akoko denaturation gun.

Deg Irẹwẹsi awoṣe --— Tun-mura awoṣe naa.

A-2 alakoko

Quality Didara to dara ti awọn alakoko ——Re-synthesize primer.

Deg Irẹjẹ alakọbẹrẹ ——Aliquot awọn alakoko ifọkansi giga sinu iwọn kekere fun titọju. Yago fun didi pupọ ati thawing tabi igba pipẹ 4 ° C cryopreserved.

Design Apẹrẹ aipe ti awọn alakoko (fun apẹẹrẹ ipari alakoko ko to, dimer ti a ṣe laarin awọn alakoko, ati bẹbẹ lọ) -Resesign primers (yago fun dida ti alakoko alakoko ati eto ile -iwe keji)

A-3 Mg²⁺fojusi

G Mg²⁺ ifọkansi ti lọ silẹ pupọ ——Pi alekun Mg daradara²⁺fojusi: Mu Mg naa dara si²⁺ ifọkansi nipasẹ lẹsẹsẹ awọn aati lati 1 mM si 3 mM pẹlu aarin 0.5 mM lati pinnu Mg ti o dara julọ²⁺ ifọkansi fun awoṣe kọọkan ati alakoko.

A-4 Afikun iwọn otutu

Temperature Iwọn otutu otutu ti o ga yoo ni ipa lori isopọ ti alakoko ati awoṣe. —— Din iwọn otutu fifẹ silẹ ki o mu ipo naa dara pẹlu gradient ti 2 ° C.

A-5 Ifaagun akoko

Time Akoko itẹsiwaju kukuru —— Mu akoko itẹsiwaju pọ si.

Q: Irọ eke

Phenomena: Awọn ayẹwo ti ko dara tun ṣafihan awọn ẹgbẹ ọkọọkan ibi -afẹde.

A-1 Kontaminesonu ti PCR

Koja kontaminesonu ti ọkọọkan ibi -afẹde tabi awọn ọja imudarasi—— Ṣọra ki a ma ṣe fa fifalẹ ayẹwo ti o ni ọkọọkan ibi -afẹde ninu ayẹwo odi tabi da wọn jade kuro ninu tube centrifuge. Awọn reagents tabi ohun elo yẹ ki o jẹ adaṣe lati yọkuro awọn acids nucleic ti o wa, ati pe aye ti kontaminesonu yẹ ki o pinnu nipasẹ awọn adanwo iṣakoso odi.

Contamin Kontaminesonu reagent ——Aliquot awọn reagents ati fipamọ ni iwọn otutu kekere.

A-2 NOMBAr

G Mg²⁺ ifọkansi ti lọ silẹ pupọ ——Pi alekun Mg daradara²⁺ fojusi: Mu Mg naa dara si²⁺ ifọkansi nipasẹ lẹsẹsẹ awọn aati lati 1 mM si 3 mM pẹlu aarin 0.5 mM lati pinnu Mg ti o dara julọ²⁺ ifọkansi fun awoṣe kọọkan ati alakoko.

Design Apẹrẹ alakọbẹrẹ ti ko pe, ati ọkọọkan ibi-afẹde naa ni isọdọkan pẹlu tito lẹsẹsẹ ti kii ṣe ibi-afẹde. ——Re-design alakoko.

Q: Imudara ti kii ṣe pato

Phenomena: Awọn ẹgbẹ titobi PCR ko ni ibamu pẹlu iwọn ti a nireti, boya nla tabi kekere, tabi nigbakan mejeeji awọn ẹgbẹ iṣapẹẹrẹ kan pato ati awọn ẹgbẹ titobi ti kii ṣe pato waye.

A-1 alakoko

Specific Ipilẹ alakoko ti ko dara

——Re-design alakoko.

Concentration Ifojusi alakoko ti ga ju ——Si alekun iwọn otutu denaturation daradara ati fa akoko denaturation sii.

A-2 Mg²⁺ fojusi

M Mg²⁺ ifọkansi ga ju ——Pipe daradara dinku ifọkansi Mg2+: Mu Mg dara si²⁺ ifọkansi nipasẹ lẹsẹsẹ awọn aati lati 1 mM si 3 mM pẹlu aarin 0.5 mM lati pinnu Mg ti o dara julọ²⁺ ifọkansi fun awoṣe kọọkan ati alakoko.

A-3 Polymerase Thermostable

Amount Iye ensaemusi ti o pọ ju—— Din iye enzymu ni deede ni awọn aaye arin 0.5 U.

A-4 Afikun iwọn otutu

Temperature Iwọn otutu imukuro ti lọ silẹ pupọ ——Bi iwọntunwọnsi iwọn otutu ti o yẹ sii tabi gba ọna imuduro ipele meji

Awọn iyipo A-5 PCR

Cy Awọn iyipo PCR lọpọlọpọ ju—— Din nọmba awọn iyika PCR din.

Q: Patchy tabi smear awọn ẹgbẹ

A-1 alakoko—— Pataki ti ko dara —— Tun-ṣe apẹrẹ alakoko, yi ipo pada ati gigun ti alakoko lati jẹki pataki rẹ; tabi ṣe PCR iteeye.

A-2 Àdàkọ DNA

——Awọn awoṣe ko jẹ mimọ ——Sọ awoṣe naa tabi yọ DNA jade pẹlu awọn ohun elo iwẹnumọ.

A-3 Mg²⁺ fojusi

——Mg²⁺ ifọkansi ga ju ——Rege daradara Mg²⁺ fojusi: Mu Mg naa dara si²⁺ ifọkansi nipasẹ lẹsẹsẹ awọn aati lati 1 mM si 3 mM pẹlu aarin 0.5 mM lati pinnu Mg ti o dara julọ²⁺ ifọkansi fun awoṣe kọọkan ati alakoko.

A-4 dNTP

—— Ifojusi ti awọn dNTP ga pupọ —— Dinku ifọkansi ti dNTP ni deede

A-5 Afikun iwọn otutu

—— Iwọn otutu imunilara kekere —— Ṣe deede mu iwọn otutu imukuro pọ si

Awọn iyipo A-6

——Ti ọpọlọpọ awọn iyipo —— Ṣe alekun nọmba ọmọ naa

Q: Elo awoṣe DNA yẹ ki o ṣafikun ninu eto ifura 50 μl PCR?

Q: Bawo ni lati ṣe alekun awọn ajẹkù gigun?

Igbesẹ akọkọ ni lati yan polymerase ti o yẹ. Polymerase Taq deede ko le ṣe atunyẹwo nitori aini iṣẹ ṣiṣe exonuclease 3'-5 ', ati aiṣedeede yoo dinku ṣiṣe itẹsiwaju ti awọn ajẹkù. Nitorinaa, polymerase Taq deede ko le ṣe alekun awọn aleebu ti o tobi ju 5 kb lọ. Taq polymerase pẹlu iyipada pataki tabi polymerase iṣootọ giga miiran yẹ ki o yan lati mu ilọsiwaju itẹsiwaju pọ si ati pade awọn iwulo ti titobi ida gigun. Ni afikun, titobi ti awọn ajẹkù gigun tun nilo atunṣe ibamu ti apẹrẹ alakoko, akoko denaturation, akoko itẹsiwaju, pH ifipamọ, ati bẹbẹ lọ Nigbagbogbo, awọn alakoko pẹlu 18-24 bp le ja si ikore ti o dara julọ. Lati le ṣe idiwọ ibajẹ awoṣe, akoko denaturation ni 94 ° C yẹ ki o dinku si iṣẹju -aaya 30 tabi kere si fun iyipo, ati akoko lati dide iwọn otutu si 94 ° C ṣaaju ki titobi yẹ ki o kere si iṣẹju 1. Pẹlupẹlu, ṣiṣeto iwọn otutu itẹsiwaju ni iwọn 68 ° C ati apẹrẹ akoko itẹsiwaju ni ibamu si oṣuwọn ti 1 kb/min le rii daju imudara to munadoko ti awọn ajẹkù gigun.

Q: Bawo ni lati ṣe ilọsiwaju iṣootọ titobi ti PCR?

Iwọn aṣiṣe ti imudara PCR le dinku nipa lilo ọpọlọpọ awọn polymerases DNA pẹlu iṣootọ giga. Laarin gbogbo awọn polymerases Taq DNA ti a rii titi di isisiyi, enzymu Pfu ni oṣuwọn aṣiṣe ti o kere julọ ati iṣootọ giga julọ (wo tabili ti a so mọ). Ni afikun si yiyan enzymu, awọn oniwadi le dinku iwọn iyipada PCR siwaju nipasẹ imudarasi awọn ipo iṣesi, pẹlu iṣapeye idapọmọra ifamọra, ifọkansi ti polymerase thermostable ati iṣapeye nọmba ọmọ PCR.

Kọ ifiranṣẹ rẹ nibi ki o firanṣẹ si wa