TGuide S32 Oofa Awọn aaye Aami Ẹjẹ DNA

A-1 Ifojusi kekere ti awọn sẹẹli tabi ọlọjẹ ninu ayẹwo ibẹrẹ-Ṣe alekun ifọkansi ti awọn sẹẹli tabi awọn ọlọjẹ.

A-2 Lysis ti ko to ti awọn ayẹwo-Awọn ayẹwo naa ko ti dapọ daradara pẹlu ifipamọ lysis. O daba lati dapọ daradara nipasẹ pulse-vortexing fun awọn akoko 1-2. —Lisisi sẹẹli ti ko to ti o fa nipasẹ idinku iṣẹ ṣiṣe ti proteinase K. —Iṣiro sẹẹli ti ko to tabi ibajẹ amuaradagba nitori akoko iwẹ gbona ti ko to. O daba lati ge àsopọ sinu awọn ege kekere ati fa akoko iwẹ lati yọ gbogbo iyoku ninu lysate.

A-3 Ipolowo DNA ti ko to. -Ko si ethanol tabi ida-kekere dipo 100% ethanol ti a ṣafikun ṣaaju ki o to gbe lysate si ọwọn iyipo.

A-4 Iye pH ti ifipamọ elution kere ju. -Ṣatunṣe pH si laarin 8.0-8.3.

Ethanol ti o ku ni giga.

- PW ifipamọ fifọ iyoku wa ni giga. A le yọ ethanol naa kuro nipa fifin fifẹ iwe iyipo fun iṣẹju 3-5, ati lẹhinna gbigbe ni iwọn otutu tabi incubator 50 for fun iṣẹju 1-2.

A-1 Ayẹwo naa kii ṣe alabapade. —Yọ DNA ayẹwo ayẹwo ti o dara bi iṣakoso lati pinnu boya DNA ninu ayẹwo ti bajẹ.

A-2 Itọju aiṣedeede aibojumu. —Nipa nipasẹ mimu omi nitrogen ti o pọ pupọ, gbigba pada ọrinrin, tabi iye ti o tobi pupọ ti ayẹwo.

Awọn idena yẹ ki o yatọ fun awọn ayẹwo oriṣiriṣi. Fun awọn ayẹwo ọgbin, rii daju lati lọ daradara ni nitrogen olomi. Fun awọn ayẹwo ẹranko, homogenate tabi lọ daradara ni nitrogen olomi. Fun awọn ayẹwo pẹlu awọn ogiri sẹẹli ti o nira lati fọ, gẹgẹbi awọn kokoro arun G+ ati iwukara, o daba lati lo lysozyme, lyticase tabi awọn ọna ẹrọ lati fọ awọn ogiri sẹẹli naa.

4992201/4992202 Ohun ọgbin Genomic DNA Kit gba ọna ti o da lori ọwọn ti o nilo chloroform fun isediwon. O dara julọ fun ọpọlọpọ awọn ayẹwo ọgbin, ati lulú gbigbẹ ọgbin. Apo Ohun ọgbin Hi-DNAsecure tun jẹ orisun-iwe, ṣugbọn laisi iwulo isediwon phenol/chloroform, ṣiṣe ni ailewu ati kii majele. O dara fun awọn ohun ọgbin pẹlu polysaccharides giga ati akoonu polyphenol. 4992709/4992710 DNAquick Plant System gba ọna orisun omi kan. Phenol/chloroform isediwon ko nilo daradara. Ilana isọdọmọ jẹ irọrun ati iyara laisi opin fun awọn iwọn ibẹrẹ ibẹrẹ, nitorinaa awọn olumulo le ṣatunṣe iye ni irọrun ni ibamu si awọn ibeere esiperimenta. Iwọn titobi ti awọn ajẹkù gDNA ni a le gba pẹlu ikore giga.

DNA ti jiini ni a fa jade lati awọn iwọn oriṣiriṣi ti awọn ayẹwo ẹjẹ gbogbo eniyan nipasẹ Ohun elo DNA TIANamp Ẹjẹ. Awọn abajade jẹ atẹle. Awọn abajade ti wa ni atokọ bi itọkasi nikan, awọn abajade isediwon gangan da lori awọn ipo ti awọn ayẹwo.

Isediwon DNA didi ẹjẹ le ṣee ṣe ni lilo awọn reagents ti a pese ni awọn ohun elo meji wọnyi nipa yiyipada ilana -iṣe si ilana kan pato fun isediwon DNA didi ẹjẹ. Ẹda rirọ ti ilana isediwon DNA didi ẹjẹ ni a le fun ni ibeere.

Da idaduro ayẹwo titun duro pẹlu 1 milimita PBS, iyo deede tabi ifipamọ TE. Papọ ayẹwo patapata nipasẹ homogenizer kan ki o gba iṣipopada si isalẹ ti ọpọn kan nipasẹ fifẹ. Sọ eleri, ki o tun ṣe atunto iṣaaju pẹlu ifipamọ 200 GAl GA. Isọdọmọ DNA atẹle le ṣee ṣe ni ibamu si ilana naa.

Fun iwẹnumọ ti gDNA ni pilasima, omi ara ati awọn ayẹwo omi ara, TIANamp Micro DNA Kit ni iṣeduro. Fun iwẹnumọ ti gDNA ọlọjẹ lati awọn ayẹwo omi ara/pilasima, TIANamp Virus DNA/RNA Kit ni a ṣe iṣeduro. Fun iwẹnumọ ti gDNA ti kokoro lati omi ara ati awọn ayẹwo pilasima, A ṣe iṣeduro TIANamp Bacteria DNA Kit (lysozyme yẹ ki o wa fun kokoro aisan to dara). Fun awọn ayẹwo itọ, Hi-Swab DNA Kit ati TIANamp Bacteria DNA Kit ni a ṣe iṣeduro.

Apo Ohun ọgbin DNAsecure tabi Eto Ohun ọgbin DNAquick ni a ṣe iṣeduro fun isediwon jiini olu. Fun isediwon jiini iwukara, Apo DNA TIANamp Yeast jẹ iṣeduro (lyticase yẹ ki o mura silẹ funrararẹ).